ATCC細胞株是用單細胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細胞增殖形成的細胞群。細胞株的特殊性質或標志必須在整個培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經傳代成功后即為細胞系(cell line), 由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細胞世系所組成。 計穩(wěn)定株構建實驗需要考慮的因素有哪些
ATCC細胞株穩(wěn)定整合試驗中的幾個關鍵因素:
1),外源插入片段的拷貝數。多數情況下,低拷貝甚至是單拷貝可以減少
人為實驗因素的干擾。
2),整合的幾率,這不僅決定了穩(wěn)定株篩選的難易程度,而且還可以幫助
人們更容易得到混合穩(wěn)定株。
3),整合位點的轉錄活躍度,決定了穩(wěn)定株中外源片段的表達質量。zui理
想的狀況是單拷貝,但轉錄活性比較高。
4),整合后的穩(wěn)定性。不同的整合位點決定了外源片段在染色體中的穩(wěn)定 性,有些區(qū)域易發(fā)生重組或者丟失,從而導致穩(wěn)定株再次丟失的情況。
5),使用混合穩(wěn)定株或者獲得多個不同單克隆穩(wěn)定株。因為穩(wěn)定整合往往伴隨這插入失活宿主內源基因,所以實驗時通過使用混合穩(wěn)定株,或者對多個單克隆穩(wěn)定株進行比較,可以幫助研究人員獲得更的實驗數據。