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簡要描述:WSU-HN30人口腔鱗狀細胞 上海復祥生物提供 ATCC 細胞|細胞系|細胞株|腫瘤細胞|細胞|貼壁細胞|懸浮細胞|,細胞庫管理規(guī)范,提供的細胞株背景清楚,提供參考文獻和培養(yǎng)條件,網(wǎng)站上有細胞照片,歡迎各位老師咨詢!
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WSU-HN30人口腔鱗狀細胞
細胞培養(yǎng)說明書
一、細胞培養(yǎng)條件
細胞英文名稱 | WSU-HN30 | 細胞中文名稱 | 人口腔鱗狀細胞 |
形態(tài)特性 | 上皮樣 | 生長特性 | 貼壁生長 |
培養(yǎng)體系 | DMEM+10%FBS | ||
傳代方法 | 1:2--1:4傳代 | 傳代情況 | 2~3天1次 |
凍存條件 | 細胞庫無血清凍存液 | ||
備注 | 收集瓶中培養(yǎng)基,留作過渡培養(yǎng)。 |
二、細胞收到后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)?/span>辦法。收到細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內,嚴格無菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察:未超過80%匯合度時,可將瓶裝的*培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml*培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過80%匯合度時,根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。(注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松,傳代后建議一瓶用原瓶里面的*培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的*培養(yǎng)基)
三、細胞培養(yǎng)步驟
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的*培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,*脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
PS:若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內,嚴格無菌操作;將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右*培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度:若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進行傳代(方法同上)。
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